Αύξηση της παραγωγής ανασυνδυασμένων ημικυτταρινασών του Fusarium oxysporum στην μεθυλότροφη ζύμη Pichia pastoris

Μαλάμου, Στυλιανή; Malamou, Styliani

dc.contributor.author	Μαλάμου, Στυλιανή	el
dc.contributor.author	Malamou, Styliani	en
dc.date.accessioned	2015-11-26T11:19:23Z
dc.date.available	2015-11-26T11:19:23Z
dc.date.issued	2015-11-26
dc.identifier.uri	https://dspace.lib.ntua.gr/xmlui/handle/123456789/41682
dc.identifier.uri	http://dx.doi.org/10.26240/heal.ntua.11159
dc.rights	Αναφορά Δημιουργού 3.0 Ελλάδα	*
dc.rights.uri	http://creativecommons.org/licenses/by/3.0/gr/	*
dc.subject	Ημικυτταρινάσες	el
dc.subject	Ξυλανάση	el
dc.subject	Εστεράση	el
dc.subject	Παραγωγή	el
dc.subject	Συνεργιτισμός	el
dc.subject	Fusarium oxysporum	en
dc.subject	Synergism	en
dc.subject	Xylanase	en
dc.subject	Esterase	en
dc.subject	Pichia pastoris	en
dc.title	Αύξηση της παραγωγής ανασυνδυασμένων ημικυτταρινασών του Fusarium oxysporum στην μεθυλότροφη ζύμη Pichia pastoris	el
heal.type	bachelorThesis
heal.classification	Biotechnology	en
heal.classificationURI	http://id.loc.gov/authorities/subjects/sh00007765
heal.access	free
heal.recordProvider	ntua	el
heal.publicationDate	2015-05-16
heal.abstract	Στην παρούσα διπλωματική εργασία πραγματοποιήθηκε κλωνοποίηση και ετερόλογη υπερέκφραση στο μεθυλότροφο μύκητα Pichia pastoris X33 της ξυλανάσης οικογένειας 11, (FoXyn11-09638) από τον μικροοργανισμό Fusarium oxysporum. Το ώριμο γονίδιο της ξυλανάσης, το οποίο παράχθηκε μετά την αποκοπή ενός εσωνίου μεταφέρθηκε στο πλασμιδιακό φορέα έκφρασης pPICZaC. Το γονίδιο με την τελική του δομή ενσωματώθηκε στο γονιδίωμα του μεθυλοτροφικού ζυμομύκητα Ρ. pastoris X33 και αξιολογήθηκε η δυνατότητα παραγωγής ενεργότητας της ξυλανάσης σε καλλιέργειες μικρής κλίμακας σε κωνικές φιάλες. Αποτελεσματικά εκκρίθηκε η ξυλανάση στα ανασυνδυασμένα κύτταρα της ζύμης Ρ. pastoris και έπειτα από προσθήκη μεθανόλης παρατηρήθηκε υψηλό επίπεδο ενζυματικής παραγωγής (110 U/mL) μετά από 216 h επώασης. Προκειμένου να αυξηθεί η παραγωγή της ξυλανάσης βελτιστοποιήθηκαν οι συνθήκες ζύμωσης, δηλαδή το αρχικό pH θρεπτικού μέσου, η ταχύτητα ανάδευσης, η συγκέντρωση μεθανόλης και το σχήμα των κωνικών φιαλών. Κάτω από τις βέλτιστες συνθήκες καλλιέργειας, η παραγωγή της ανασυνδυασμένης ξυλανάσης αυξήθηκε κατά 50%, φτάνοντας την τελική απόδοση των 170 U/mL, που υποδεικνύουν ότι ο αερισμός είναι ο πιο σημαντικός παράγοντας για τη βελτίωση της παραγωγής ενζύμων. Επίσης πραγματοποιήθηκαν μια σειρά πειραμάτων που αριστοποιούν την παραγωγή της εστεράσης του φερουλικού οξέος (FoFaeC-12213), η οποία κλωνοποιήθηκε και υπερεκφράστικε από τους Moukouli et al, 2008. Εκτιμήθηκε η επίδραση της αρχικής τιμής ρΗ, η συγκέντρωση μεθανόλης, ο ρυθμός της ανάδευσης και ο σχεδιασμός των φιαλών για τον αερισμό της καλλιέργειας ομοίως με την ξυλανάση. Παρατηρήθηκε ότι η παραγωγή της εστεράσης αυξήθηκε κατά 60% περίπου φτάνοντας στην τελική απόδοση των 1512 U/L. Και πάλι εδώ βγάζουμε το συμπέρασμα ότι ο αερισμός είναι σημαντικός για την βελτίωση της παραγωγής ενζύμων και συγκεκριμένα της εστεράσης. Τέλος, τα εξαγόμενα αποτελέσματα των δύο βελτιστοποιημένων εκφράσεων συγκρίθηκαν μεταξύ τους και συζητήθηκαν.	el
heal.advisorName	Τόπακας, Ευάγγελος	el
heal.committeeMemberName	Κέκος, Δημήτριος	el
heal.committeeMemberName	Τόπακας, Ευάγγελος	el
heal.committeeMemberName	Κολίσης, Φραγκίσκος	el
heal.academicPublisher	Εθνικό Μετσόβιο Πολυτεχνείο. Σχολή Χημικών Μηχανικών	el
heal.academicPublisherID	ntua
heal.numberOfPages	71 σ.	el
heal.fullTextAvailability	true