Βελτίωση της παραγωγής μίας ανασυνδυασμένης
εστεράσης του φερουλικού οξέος του Fusarium
oxysporum στη μεθυλότροφη ζύμη Pichia pastoris

Κωστής, Ανδρόνικος; Kostis, Andronikos

dc.contributor.author	Κωστής, Ανδρόνικος	el
dc.contributor.author	Kostis, Andronikos	en
dc.date.accessioned	2016-10-12T08:58:18Z
dc.date.available	2016-10-12T08:58:18Z
dc.date.issued	2016-10-12
dc.identifier.uri	https://dspace.lib.ntua.gr/xmlui/handle/123456789/43788
dc.identifier.uri	http://dx.doi.org/10.26240/heal.ntua.12694
dc.rights	Αναφορά Δημιουργού-Μη Εμπορική Χρήση-Όχι Παράγωγα Έργα 3.0 Ελλάδα	*
dc.rights.uri	http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/gr/	*
dc.subject	Ένζυμο	el
dc.subject	Εστεράση	el
dc.subject	Ενεργότητα	el
dc.subject	Φερουλικό οξύ	el
dc.subject	Πρωτεΐνη	el
dc.subject	Cutinase	en
dc.subject	Esterase	en
dc.subject	Protein	en
dc.subject	Cultivation	en
dc.subject	Chromatography	en
dc.title	Βελτίωση της παραγωγής μίας ανασυνδυασμένης εστεράσης του φερουλικού οξέος του Fusarium oxysporum στη μεθυλότροφη ζύμη Pichia pastoris	el
heal.type	bachelorThesis
heal.generalDescription	'Ελεγχος συμπεριφοράς πρωτεΐνης μέσω καλλιεργειών με μεταβολή συνθηκών	el
heal.classification	Βιοτεχνολογία	el
heal.classificationURI	http://data.seab.gr/concepts/17d26c7ad4b1baa3e1976533f499eef793ef5338
heal.language	el
heal.access	free
heal.recordProvider	ntua	el
heal.publicationDate	2014-06-12
heal.abstract	Η παρούσα διπλωματική εργασία χωρίζεται σε δύο τμήματα, δεδομένου ότι πρόκειται για τη μελέτη της παραγωγής και απομόνωσης δύο ομοειδών βασικών πρωτεινών, της κουτινάσης και της εστεράσης του φερουλικού οξέος. Όσον αφορά το πρώτο μέρος, έγινε προσπάθεια για την παραγωγή και απομόνωση της πρωτείνης κουτινάσης, μέσω της διαδικασίας καλλιέργειας του μύκητα Fusarium Oxusporum στη μεθυλότροφη ζύμη Pichia pastoris. Μετά την παραλαβή του διαλύματος των καλλιεργειών και αφού ακολούθησαν διαδοχικές διηθήσεις, το διήθημα πέρασε από στήλη χρωματογραφίας με βαθμίδωση άλατος NaCl προκειμένου να φανερωθεί μέσω διαγράμματος η ύπαρξη ή μη της πρωτείνης κουτινάσης, και εν τέλει αυτή να καταπέσει και να παραληφθεί. Στη συνέχεια και αφού το διάλυμα των φιαλιδίων που θεωρητικά εμπεριείχαν τη ζητούμενη πρωτείνη τοποθετήθηκε στη διάταξη της μεθόδου sds-page, όπου με βάση τα μοριακά βάρη τους γίνονται φανερά τα είδη των υπαρχόντων πρωτεινών, διαπιστώθηκε η ανεπαρκής ποσότητα πρωτείνης που παραλήφθηκε, συγκριτικά με τις υπόλοιπες που ενυπήρχαν ως ανεπιθύμητες προσμίξεις στο διάλυμα. Στο δεύτερο μέρος και εξαιτίας της αδυναμίας μελέτης της κουτινάσης, ακολουθήθηκε η μελέτη των βέλτιστων συνθηκών κυτταρικής ανάπτυξης σε υπόστρωμα Pichia pastoris ανάλογης σε μέθοδο παραγωγής πρωτείνης, της εστεράσης του φερουλικού οξέος. Στην πρώτη σειρά μετρήσεων χρησιμοποιήθηκαν διαφορετικών τιμών pH ρυθμιστικά διαλύματα, διατηρώντας σταθερή την τροφοδοσία της μεθανόλης και την ταχύτητα ανάδευσης. Ακολούθως στη δεύτερη σειρά μετρήσεων διατηρήθηκε σταθερή τιμή pH και ταχύτητας ανάδευσης, μεταβάλλοντας ανά ζευγάρι φιαλών καλλιέργειας τη δοσολογία της μεθανόλης, ενώ κατά την τρίτη σειρά μετρήσεων μεταβλήθηκε η ταχύτητα ανάδευσης ανα ζευγάρι φιαλών, διατηρώντας pH και μεθανόλη σταθερά. Τα αποτελέσματα που εξήχθησαν συγκρίθηκαν με βιβλιογραφική μελέτη ανάλογης κυτταρικής ανάπτυξης και συμπεριφοράς πρωτείνης, της ξυλανάσης, προκειμένου να διαπιστωθεί η αρτιότητα των πειραματικών αποτελεσμάτων.	el
heal.abstract	The present thesis is divided into two sections, following its content material, which is the study of the production and of the isolation of two similar basic proteins: first of Cutinase and second of the esterase of ferulic acid Regarding the first part, an attempt was made for the production and isolation of the protein Cutinase through the cultivation of the fungus Fusarium Oxusporum in methylotrophic yeast Pichia pastoris. After receiving the cultivation solution and after passing it through successive filtration processes, the remaining filtrate was passed through a chromatography tower of a NaCl salt elusion gradient, to manifest, through mapping, the presence or absence of the protein Cutinase, and ultimately for the tested production method to be forfeited or to be rejected. The finally received vials filled with the distilled solution, which would contain theoretically the desired protein, were placed in the measurement bench of the sds-page method. According to the sds-page method, the various types of existing proteins are revealed after measuring the molecular weights of the all found proteins in the solution. According to the measurement results, insufficient amount of Cutinase protein is produced, compared to the other proteins inherent as impurities in the solution. Because of the aforementioned difficulty in Cutinase study, the second part of the thesis was decided to contain the study of the optimal conditions of cell growth in ichia pastoris substrate of the ferulic acid esterase, a protein similar in behaviour to the Cutinase. Three series of measurements were conducted, to study the influence of three different factors in cell growth, namely the influence of the pH, the influence of the stirring speech, and the influence of the methanol feed. In each of the measurements series, one of the above factors was varied, while the rest two were kept constant. For the verification and the integrity of the obtained experimental results, a literature survey was conducted, and the results obtained here above were compared to found published results of measurements concerning similar study of cell growth and behaviour of the protein xylanase.	en
heal.advisorName	Τόπακας, Ευάγγελος	el
heal.committeeMemberName	Κέκος, Δημήτριος	el
heal.committeeMemberName	Κολίσης, Φραγκίσκος	el
heal.academicPublisher	Εθνικό Μετσόβιο Πολυτεχνείο. Σχολή Χημικών Μηχανικών. Τομέας Σύνθεσης και Ανάπτυξης Βιομηχανικών Διαδικασιών (IV). Εργαστήριο Βιοτεχνολογίας	el
heal.academicPublisherID	ntua
heal.numberOfPages	87 σ.	el
heal.fullTextAvailability	true