Μελέτη της συνεργιστικής δράσης δυο εστερασών του γλυκουρονικού οξέος μαζί με ξυλανάσες για την αποικοδόμηση της λιγνινοκυτταρινούχου βιομάζας

Κόκορης-Κόγιας, Γεώργιος; Kokoris-Kogias, Georgios

dc.contributor.author	Κόκορης-Κόγιας, Γεώργιος	el
dc.contributor.author	Kokoris-Kogias, Georgios	en
dc.date.accessioned	2020-04-24T08:51:33Z
dc.date.available	2020-04-24T08:51:33Z
dc.identifier.uri	https://dspace.lib.ntua.gr/xmlui/handle/123456789/50230
dc.identifier.uri	http://dx.doi.org/10.26240/heal.ntua.17928
dc.rights	Αναφορά Δημιουργού 3.0 Ελλάδα	*
dc.rights.uri	http://creativecommons.org/licenses/by/3.0/gr/	*
dc.subject	Συνεργιστική δράση	el
dc.subject	Λιγνινοκυτταρινούχος	el
dc.subject	Διάσπαση βιομάζας	el
dc.subject	Λιγνίνη	el
dc.subject	Ξυλανάσες	el
dc.subject	Synergistic	en
dc.subject	Biomass	en
dc.subject	Lignin	en
dc.subject	Xylan	en
dc.subject	Diversion	en
dc.title	Μελέτη της συνεργιστικής δράσης δυο εστερασών του γλυκουρονικού οξέος μαζί με ξυλανάσες για την αποικοδόμηση της λιγνινοκυτταρινούχου βιομάζας	el
heal.type	bachelorThesis
heal.classification	Βιοτεχνολογία	el
heal.language	el
heal.access	free
heal.recordProvider	ntua	el
heal.publicationDate	2019-10-03
heal.abstract	Στην παρούσα διπλωματική εργασία μελετήθηκε τόσο η παραγωγή όσο και η απομόνωση δύο καινοτόμων εστερασών του γλυκουρονικού οξέος. Ακόμα μελετήθηκε και η συνεργιστική δράση των δυο αυτών εστερασών με δυο ενδοξυλανάσες των μικροοργανισμών Fusarium oxysporum και Τhermothelomyces thermophila. Oι δύο αυτές ενδοξυλανάσες είναι η GH11 και η GH30. Σε πρώτο στάδιο το γονίδια των γλυκουρονικών οξέων AeGE15 και TlGE15 εκφράστηκαν, παράχθηκαν και απομονώθηκαν μέσω του συστήματος ετερόλογης έκφρασης της μεθυλότροφης ζύμης Pichia pastoris. Αρχικά η παραγωγή έγινε σε υγρές καλλιέργειες των κυττάρων της ζύμης και στην συνέχεια η απομόνωση πραγματοποιήθηκε μέσω των σταδίων διήθησης, συμπύκνωσης και χρωματογραφίας συγγένειας ακινητοποιημένου μετάλλου (IMAC) Τα μοριακά βάρη των δύο ενζύμων προσδιορίστηκαν μέσω ηλεκτροφόρησης πηκτής πολυακρυλαμιδίου (SDS-PAGE) και τα ισοηλεκτρικά τους σημεία μέσω ηλεκτροφόρησης ισοηλεκτρικής εστίασης σε πήκτωμα πολυακρυλαμιδίου (ΙEF-PAGE).Στην συνέχεια έλαβαν χώμα αντιδράσεις με υποστρώματα λιγνινών από προκατεργασία λιγνοκυτταρινούχου βιομάζας με μίγμα νερού/ακετόνης με σκοπό την μελέτη της συνεργιστικής δράσης των εστερασών του γλυκουρονικού οξέος AeGE15 και TlGE15 με τις ξυλανάσες GH11 και GH30. Σε δεύτερο στάδιο έγινε χρήση της μεθόδου χρωματογραφίας εναλλαγής ανιόντων ως τεχνική μεγαλύτερης ευαισθησίας για τη μελέτη του συνεργιτισμού των ενζύμων. Η ανίχνευση πραγματοποιείται μέσω της ανίχνευσης γραμμικών ολιγοσακχαριτών της ξυλόζης. Από τα χρωματογραφήματα, παρατηρήθηκε αύξηση της συγκέντρωσης των απελευθερούμενων σακχάρων στις αντιδράσεις που χρησιμοποιήθηκαν και τα 2 ένζυμα σε σύγκριση με τις αντιδράσεις που χρησιμοποιήθηκε μόνο η ξυλανάση. Ακόμα πιο έντονη ήταν η διαφορά της συγκέντρωσης όταν είχαμε την ξυλανάση GH30. Επομένως ο συνεργιτισμός ανάμεσα στα δύο ένζυμα επαληθεύτηκε σε 7 από τις 10 περιπτώσεις άρα δεν μπορούμε να εξάγουμε ασφαλή συμπεράσματα για την λειτουργία των ενζύμων.	el
heal.abstract	In the present thesis, the production and the isolation of two novel glucuronic acid esters were studied. The synergistic effect of these two esters with two endoxylases of the microorganisms Fusarium oxysporum and Thermothelomyces thermophila was also studied. These two endoxylanases are GH11 and GH30. In the first step, the genes for the glucuronic acids AeGE15 and TlGE15 were expressed, produced and isolated through the heterologous expression system of the methylotrophic yeast Pichia pastoris. Initially the production was made in dough cultures of dough cells and then isolation was carried out through the steps of immobilized metal affinity chromatography, condensation and affinity chromatography (IMAC). The molecular weights of the two enzymes were determined by polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and their isoelectric points by polyacrylamide gel isoelectric focusing (IEF-PAGE).Subsequently, soil reactions with lignin substrates were obtained by pretreatment of lignocellulose biomass with a water/acetone mixture to study the synergistic action of glucuronic acid esterases AeGE15 and TlGE15 with xylanases GH11 and GH30. In the second step, the anion exchange chromatography method was used as a more sensitive technique for the study of enzyme synergism. Detection is performed by the detection of linear xylose oligosaccharides. From the chromatograms, an increase in the concentration of released sugars was observed in the reactions used for both enzymes compared to the reactions used for xylanase alone. Even more pronounced was the difference in concentration when we had xylanase GH30. Therefore, the synergistic action between the two enzymes was verified in 7 out of 10 cases and therefore no reliable conclusions can be drawn for the function of the enzymes.	en
heal.advisorName	Tόπακας, Ευάγγελος	el
heal.committeeMemberName	Τόπακας, Ευάγγελος	el
heal.committeeMemberName	Κέκος, Δημήτριος	el
heal.committeeMemberName	Καβουσανάκης, Μιχάλης	el
heal.academicPublisher	Εθνικό Μετσόβιο Πολυτεχνείο. Σχολή Χημικών Μηχανικών. Τομέας Σύνθεσης και Ανάπτυξης Βιομηχανικών Διαδικασιών (IV)	el
heal.academicPublisherID	ntua
heal.numberOfPages	86 σ.
heal.fullTextAvailability	false