Μελέτη του λιπιδικού προφίλ του ξενιστή παρουσία παραγόντων
που επηρεάζουν τον ηπατικό λιπιδικό μεταβολισμό στην HCV
μόλυνση

Δελής, Αλφόνσος Ελευθέριος; Delis, Alfonsos Eleftherios

dc.contributor.author	Δελής, Αλφόνσος Ελευθέριος	el
dc.contributor.author	Delis, Alfonsos Eleftherios	en
dc.date.accessioned	2021-04-12T10:15:13Z
dc.identifier.uri	https://dspace.lib.ntua.gr/xmlui/handle/123456789/53323
dc.identifier.uri	http://dx.doi.org/10.26240/heal.ntua.21021
dc.rights	Default License
dc.subject	HCV	en
dc.subject	Lipid metabolism	en
dc.subject	Cellular regulators	en
dc.subject	Epigenetic regulators	en
dc.title	Μελέτη του λιπιδικού προφίλ του ξενιστή παρουσία παραγόντων που επηρεάζουν τον ηπατικό λιπιδικό μεταβολισμό στην HCV μόλυνση	el
heal.type	bachelorThesis
heal.classification	Molecular biology	en
heal.dateAvailable	2022-04-11T21:00:00Z
heal.language	el
heal.access	embargo
heal.recordProvider	ntua	el
heal.publicationDate	2021-02-26
heal.abstract	Η χρόνια λοίμωξη που προκαλείται από τον ιό της Ηπατίτιδας C (HCV) αποτελεί σοβαρό πρόβλημα της παγκόσμιας δημόσιας υγείας, με περίπου 71 εκατομμύρια φορείς του ιού. Ένα μεγάλο ποσοστό των HCV ασθενών εμφανίζουν ηπατική φλεγμονή και στεάτωση, οι οποίες εξελίσσονται σε ηπατική ίνωση, κίρρωση και ηπατοκυτταρικό καρκίνο (ΗΚΚ). Η αλληλεπίδραση του ιού με τον κυτταρικό λιπιδικό μεταβολισμό είναι πολυεπίπεδη, καθώς ο ιός χρησιμοποιεί λιπίδια σε όλα τα στάδια του κύκλου ζωής του. Κυτταρικοί και επιγενετικοί ρυθμιστές του λιπιδικού μεταβολισμού του ξενιστή, όπως τα βιομόρια ANGPTL-3 (Angiopoietin-like 3) και LSD1 (Lysine-specific demethylase 1) αλλά πιθανώς και άλλες συγγενείς πρωτεΐνες όπως οι ANGPTL-4 και LSD2 εμπλέκονται σε αυτές τις αλληλεπιδράσεις. Σκοπός της παρούσας διπλωματικής εργασίας είναι η μελέτη του λιπιδικού προφίλ ηπατικών κυτταροσειρών που υπερεκφράζουν τους παραπάνω ρυθμιστικούς παράγοντες παρουσία ή απουσία του HCV. Στα πειράματα που πραγματοποιήθηκαν, προσδιορίστηκε η ενζυμική ενεργότητα της ηπατικής λιπάσης (HL) στόχου των ANGPTLs σε ηπατικές κυτταροσειρές υπερέκφρασης των ANGPTL-3 και ANGPTL-4 και βρέθηκε πως η αυξημένη έκφραση αυτών των μορίων προκαλεί μερική αναστολή της ενζυμικής ενεργότητας της HL. Παρατηρήθηκε επίσης μείωση των ενδογενών επιπέδων των ηπατικών τριγλυκεριδίων, πιθανόν λόγω μειωμένης εισόδου λιπιδίων από την κυκλοφορία μέσω της HL, καθώς και μείωση του αριθμού των λιποσταγονιδίων – αποθηκών των τριγλυκεριδίων στις κυτταροσειρές αυτές. Η μόλυνση των κυτταροσειρών με τα ιικά στελέχη HCV-2a και HCV-3a δεν κατάφερε να αναστρέψει τις παρατηρούμενες μειώσεις στις δοκιμαζόμενες παραμέτρους του ηπατικού λιπιδικού μεταβολισμού, αν και ο HCV έχει δειχθεί να αυξάνει την ηπατική λιπογένεση. Κατά την ποιοτική εκτίμηση του αριθμού των ενδοκυτταρικών λιποσταγονιδίων σε κυτταροσειρά υπερέκφρασης του επιγενετικού παράγοντα LSD1, ο οποίος είναι θετικός ρυθμιστής της ANGPTL-3, αυτά βρέθηκαν μειωμένα. Παρατηρήθηκε και σε αυτή τη περίπτωση πως η μόλυνση αυτού του κλώνου με τον ιό HCV-3a δεν κατάφερε να αποκαταστήσει τα φυσιολογικά επίπεδα των λιποσταγονιδίων. Τέλος, εξετάστηκε για πρώτη φορά η πιθανότητα αλληλεπίδρασης του συγγενικού με την LSD1 επιγενετικού παράγοντα LSD2 με τον HCV. Ύστερα από προσδιορισμό των επιπέδων mRNA της LSD2 σε ηπατοκύτταρα Huh7.5 μετά από μόλυνση με το ιικό στέλεχος HCV-3a, διαπιστώθηκε πως ο ιός επηρεάζει διαφορικά την έκφραση της κατά τη διάρκεια του κύκλου ζωής του, υποδεικνύοντας ένα νέο μηχανισμό ιικής ρύθμισης του λιπιδικού μεταβολισμού του ξενιστή. Τέλος, φάνηκε πως η υπερέκφραση της LSD2 σε ηπατοκύτταρα μολυσμένα με HCV, περιορίζει σημαντικά τον ιικό αναδιπλασιασμό. Η ταυτοποίηση τέτοιων μηχανισμών βοηθά στην καλύτερη κατανόηση του κύκλου ζωή του HCV και της παθοβιολογίας της HCV-εξαρτώμενης ηπατικής νόσου, ενώ παράλληλα μπορεί να οδηγήσει σε ανάπτυξη καινοτόμων θεραπειών.	el
heal.abstract	Ηepatitis C virus (HCV) infection is a serious global public health problem, with approximately 71 million chronically infected individuals. A high percentage of HCV patients develops liver inflammation and steatosis, which progress to liver fibrosis, cirrhosis, and hepatocellular carcinoma (HCC). The interaction of the virus with cellular lipid metabolism is multifaceted, as the virus uses lipids at all stages of its life cycle. Cellular and epigenetic regulators of host lipid metabolism, such as the biomolecules ANGPTL-3 (Angiopoietin-like 3) and LSD1 (Lysine-specific demethylase 1), but possibly other related proteins such as ANGPTL-4 and LSD2, are also involved in these interactions. The aim of this dissertation is to study the lipid profile of hepatic cell lines that overexpress the above regulatory factors in the presence or absence of HCV. In the performed experiments, we determined the enzymatic activity of hepatic lipase (HL), a target molecule of ANGPTLs in hepatic cell lines that overexpress ANGPTL-3 and ANGPTL-4. It was found that increased expression of these molecules causes partial inhibition of HL’s enzymatic activity. The endogenous levels of hepatic triglycerides were also found decreased in these cell lines, possibly due to reduced lipid uptake from the circulation through HL. This finding was complemented by a lower number of hepatic lipid droplets that serve as intracellular stores for triglycerides. Infection of the overexpressing cell lines with the viral strains HCV-2a and HCV-3a failed to reverse the observed reductions in the tested parameters of hepatic lipid metabolism, despite the fact that HCV has been shown to increase hepatic lipogenesis. When we performed a qualitative assessment of the number of intracellular lipid droplets in a hepatic cell line that overexpresses the epigenetic factor LSD1, which is a positive regulator of ANGPTL-3, they were found to be reduced. It was also observed in this case that the infection of this clone with the HCV-3a virus failed to restore the normal levels of the lipid droplets. Finally, the possibility of interaction of LSD1-related epigenetic factor LSD2 with HCV was examined for the first time. After determining the mRNA levels of LSD2 in Huh7.5 hepatocytes following infection with the viral strain HCV-3a, it was shown that the virus differentially affects its expression during its life cycle, indicating a new mechanism of viral regulation of lipid metabolism of the host. Finally, overexpression of LSD2 in HCV-infected hepatocytes has been demonstrated to significantly reduce viral replication. In conclusion, we observed that the increased expression of the studied cellular and epigenetic regulatory molecules significantly affects the lipid profile of hepatocytes and consequently the progression of viral infection. The identification and characterization of such mechanisms helps to better understand the life cycle of HCV and the pathobiology of HCV-dependent liver disease, while at the same time it can lead to the development of novel therapies.	en
heal.advisorName	Τόπακας, Ευάγγελος	el
heal.advisorName	Φωκά, Πελαγία	el
heal.committeeMemberName	Τόπακας, Ευάγγελος	el
heal.committeeMemberName	Μαμμά, Διομή	el
heal.committeeMemberName	Καραγιάννη, Χάιδω Στεφανία	el
heal.academicPublisher	Εθνικό Μετσόβιο Πολυτεχνείο. Σχολή Χημικών Μηχανικών. Τομέας Σύνθεσης και Ανάπτυξης Βιομηχανικών Διαδικασιών (IV)	el
heal.academicPublisherID	ntua
heal.numberOfPages	98 σ.	el
heal.fullTextAvailability	false