Μελέτη Επίδρασης Υπεριώδους Ακτινοβολίας σε Λεπτά Υμένια Κολλαγόνου

Abstract

Σκοπό της Διπλωματικής Εργασίας αυτής αποτελεί η διερεύνηση της επίδρασης της υπεριώδους ακτινοβολίας σε λεπτά υμένια κολλαγόνου και η επακόλουθη διερεύνηση της επίδρασης σε ανάπτυξη καλλιέργειας ινοβλαστών. Προκειμένου να επιτευχθούν οι στόχοι αυτοί, υγρό διάλυμα κολλαγόνου ακτινοβολήθηκε με υπεριώδη ακτινοβολία σε μήκος κύματος 254 nm (UV-C). Το γεγονός αυτό αποτελεί πρωτοτυπία της Διπλωματικής Εργασίας, καθώς όπως φαίνεται και στη διεθνή βιβλιογραφία, η ακτινοβόληση πραγματοποιείται κυρίως σε κολλαγόνο το οποίο είναι στην τελική του μορφή και όχι ενόσω είναι ακόμα διάλυμα.

Η παρούσα Διπλωματική Εργασία αποτελείται από δύο μέρη, το θεωρητικό και το πειραματικό. Στο θεωρητικό μέρος της Διπλωματικής Εργασίας παρουσιάζονται βασικές πληροφορίες για το κολλαγόνο, καθώς και για την επίδραση της υπεριώδους ακτινοβολίας σε αυτό. Επιπλέον παρατίθενται πληροφορίες για τους ινοβλάστες, τα κύτταρα που καλλιεργήθηκαν και απεικονίστηκαν σε λεπτά υμένια κολλαγόνου. Παρουσιάζονται τα χρησιμοποιούμενα μικροσκόπια, το Μικροσκόπιο Ατομικής Δύναμης (Atomic Force Microscope ή AFM) και το μικροσκόπιο φθορισμού. Στο πειραματικό μέρος της Διπλωματικής Εργασίας περιγράφονται λεπτομερώς οι μέθοδοι και τεχνικές που αναπτύχθηκαν με σκοπό την ανάπτυξη, τη χρώση και τη σταθεροποίηση των δειγμάτων, καθώς και τα αποτελέσματα που ελήφθησαν κατόπιν απεικόνισης των δειγμάτων. Τα αποτελέσματα της Διπλωματικής Εργασίας τελικά συγκρίνονται με προηγούμενες μελέτες που αφορούν το UV-ακτινοβολημένο κολλαγόνο.

The purpose of this Diploma Thesis is the investigation of the influence of UV-radiation on thin collagen films and the subsequent investigation of its effect on fibroblasts’ culture. In order to achieve these goals, a liquid collagen solution was UV-irradiated at a wavelength of 254 nm (UV-C). This consists an innovation of this Diploma Thesis as, according to international citations, UV irradiation has been applied mainly on fully formed collagen and not on collagen solution.

This Diploma Thesis consists of two parts which relate to theory and experiment, respectively. In the theory part of this Diploma Thesis basic information about collagen is presented, as well as information about the effect of UV-irradiation on collagen. There is also information about fibroblasts, the type of cells that were cultured and imaged on thin collagen films. The microscopes used are described, namely the Atomic Force Microscope (AFM) and the fluorescence microscope. Methods and techniques that were developed for the making, staining and fixing of the samples are described in detail at the experiment part of this Diploma Thesis, as well as the results taken from the imaging of samples. The results of this Diploma Thesis are finally compared to previous studies concerning UV-irradiated collagen.